SARS-CoV-2, geniş bir proteaz yelpazesi tarafından füzyon için aktive edilir.

 Şiddetli akut solunum sendromu koronavirüs 2'nin (SARS-CoV-2), konakçı hücre yüzeyinde anjiyotensin dönüştürücü enzim 2 (ACE2) reseptörü ile bağlandığı iyi bilinmektedir. Bu işlem, konakçı proteazlar tarafından elde edilen hücre girişi ile konak-virüs membran füzyonunu kolaylaştırır.

Kullanılan belirli konakçı proteaz betakoronavirüsler arasında değişiklik gösterir , ancak SARS-CoV-2'nin esas olarak, genellikle geç endozomda bulunan katepsinleri kullandığı görülmektedir , bu da SARS-CoV-2'nin hücreye endositotik yolla girdiğini düşündürmektedir. Karşılaştırıldığında, MERS-CoV'nin ağırlıklı olarak TMPRSS2 tarafından etkinleştirildiği ve doğrudan hücre yüzeyinde girişe izin verdiği düşünülmektedir , ancak SARS-CoV-2'nin de bu mekanizmayı kullandığı gözlemlenmiştir.


Girişe izin vermek için birden fazla tetikleyicinin gerekli olması veya hücre tipine bağlı olarak birden fazla yolun eşit derecede mümkün olması mümkündür, ancak bu mekanizmaları araştırmak için hedeflenen proteolitik inhibitörleri kullanan çalışmalar, normal membran bileşimini ve işlevini bozabilir.

Yakın zamanda bioRxiv * ön baskı sunucusunda yayınlanan yeni bir çalışmada , ABD, Virginia Üniversitesi'nden bir araştırma ekibi, doğrudan aktivasyon mekanizmasını araştırmak için dışsal olarak kontrol edilen proteazlarla tek virüs füzyon deneylerini kullandı. Girişin hücre altı konumunun çeşitli bileşenlerin proteaz aktivitesine bağlı olduğunu ve paralel yolların mümkün olduğunu bulmuşlardır.

Çalışma nasıl yapıldı?

Grup, bir mikroakışkan akış hücresinde ACE2 ve düşük seviyelerde TMPRSS2 eksprese eden bir konak hücre plazma membranını hareketsizleştirdi ve virüsü bir lipid fazı florofor ile etiketledi. Proteazlar daha sonra akış hücresine eklendi ve hücre girişini kolaylaştırdıkları yerde, flüoroforlar, hücre altı konumunu vurgulamak için çözüldü. Bu amaçla Vero hücre membranları kullanılmış ve bu hücreler ile eksojen proteaz yokluğunda kullanılan psödovirüsler arasında minimal füzyon gözlemlenmiştir.

Karşılaştırma için, daha yüksek TMPRSS2 seviyeleri ve benzer ACE2 seviyeleri ifade eden Calu-3 hücreleri, psödovirüsler tarafından daha kolay girilebilir. Psödovirüsler, HIV, Indiana vesiculovirus (VSV) veya SARS-CoV-2 spike proteinini ifade eden murin lösemi virüslerinden (MLV) kaynaklı viral bir membrandan oluşuyordu Grup, VSV zarının, başak protein yoğunluğunu destekleyebildiğini ve böylece hücreye diğerlerinden daha hızlı girdiğini belirtti.

Grup, psödovirüslerle kombinasyon halinde eksojen olarak sokulan dört proteazı test etti: TMPRSS11D, aynı zamanda insan hava yolu tripsin benzeri (HAT) proteaz olarak da bilinir, hava yolu dokularında bulunan bir serin proteaz; Katepsin B ve L, geç endozomal proteazlar; ve alveolar hücrelerde bulunan hücre yüzeyi proteazı olan TMPRSS2. Bu proteazların her biri SARS-CoV-2 spike proteinini füzyon için aktive edebildi ve her biri benzer füzyon süreleri gösterdi.

Buna dayanarak grup, proteolitik aktivasyonun ACE2 ile bağlanmadan önce veya sonra herhangi bir noktada meydana gelebileceğini öne sürmektedir: HAT ile hücre dışı ortamda, TMPRSS2 ile hücre yüzeyinde veya Katoepsinler tarafından bir endozom içinde. Hücre girişinin bir yolu, burada incelenen belirli proteazlardan herhangi birinin daha yüksek konsantrasyonuna sahip dokularda veya hücrelerde tercih edilir.

Proteaz inhibitörleri, ilaç SARS-CoV-2'ye yol açtığı için iyi araştırılmıştır. Çoğu zaman in vitro olarak etkileyici virüs inhibisyonu sergilemesine rağmen , yazarların bu çoklu fırsatçı yollara atfettiği in vivo aşamada sıklıkla yetersiz kalırlar.

* Önemli Uyarı

bioRxiv, hakemli olmayan ve bu nedenle kesin olarak değerlendirilmemeli, klinik uygulamaya / sağlıkla ilgili davranışlara rehberlik etmemeli veya yerleşik bilgiler olarak değerlendirilmemeli ön bilimsel raporlar yayınlar.

Dergi referansı:

Yorum Gönder

0 Yorumlar